分析两个nodT基因的功能在根瘤菌Etli这些副本直接参与有节的过程
a . Hernandez-Mendoza t Scheublin:纳瓦,o .桑塔纳Quinto
Departamento de Biologia分子de足底。皇家研究院Biotecnologia,大学根据墨西哥Apdo。62251年邮政510 - 3 C.P.库埃纳瓦卡,莫洛雷斯,墨西哥
在根瘤菌etli我们先前描述的隔离两个nodT副本,一个位于质粒c (nodTplc)和其他染色体上(nodTcro) (Hernandez-Mendoza 1999)
为了分析nodTcro函数,我们一直在努力获得这个基因的插入没有成功。然而,如果我们第一次补充与野生型基因转化,得到了稳定的插入。因为这个过程已经成功了不必要的基因定点诱变nodTplc r . etli,我们建议在r . etli nodTcro是生存所必需的在这种情况下,也可能编码一个基本功能。我们现在隔离双重组治愈的补充质粒分析nodTcro突变表型。另一方面,两个orf nodTcro上游发现有73%到63%的身份ameAB根癌土壤杆菌和mexAB铜绿假单胞菌,分别。NodT身份与阿美科和OprM 50%和30%,分别。AmeABC和MexAB-OprM形成耐多药外排泵。
来洞察nodTplc的可能的功能基因,该副本已经被插入诱变处理壮观霉素录音带。nodTplc有节表型变异没有清楚。然而,两个orf 30 - 50%的身份与大肠杆菌cpxAR基因局部nodTplc上游。CpxAR形成一个双组分信号转导系统在大肠杆菌对热休克和膜损伤。一个假定的a24催化剂也发现上游nodTplc序列。为了分析这种基因的作用反应外膜损伤应力由热休克和耐热性,我们分析了增长行为的突变对野生型不同的温度。然而,我们的研究结果表明,nodTplc没有参与细菌生长在不同的温度下无论是在基底耐热性条件下,我们已经进行了分析。
假定的启动子序列subcloned到表达载体pBB53:: gitovl在这两个方向,报告基因的上游uidA (P-glucoronidase活动)。这个质粒是动员野生型r . etli triparental交配。格斯化验表明,启动子在正确的方向有一个2-4-fold高表达对启动子的相反方向的乙醇,热休克条件或在标准条件。这表明前启动子方向基底活动但不应对温度变化或乙醇的存在条件,我们已经测试了。
综上所述,我们的研究结果表明,nodTcro nodTplc有不同的,但不是在r . etli生理互补作用。然而,生化,遗传的和生理的研究仍然必须进行充分描述这些基因。
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