报告线路的建设
为了研究枸杞细胞质桥形成和根瘤形成的机制，构建了若干标记系。对于启动子活性的分析，使用由绿色荧光蛋白(GFP)和(5-葡萄糖醛酸酶(GUS)基因组成的融合结构通常非常有用(Quaedvlieg等，1998年)。利用这一结构，我们获得了不同的转基因粳稻株系，这些株系将用于分析对点头的因素．这些启动子要么是已知的启动子，是根据它们对Nod因子或植物激素的已知反应而选择的。我们将GH3启动子与GUS-GFP报告基因结构融合，以分析Nod因子对L. japonicus生长素转运的影响。我们还将大豆和L. japonicus的ENOD40启动子(ENOD40-1: Flemetakis et al. 2000)与GUS-GFP融合。除了外部添加Nod因子和植物激素外，我们还遵循Mathesius等人(1998)的策略使用微靶向。
为了分析绿色荧光蛋白，我们实验室采用了各种显微成像技术(Spaink et al. 2000)。最常用的技术是共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)，它可以实现活组织中绿色荧光蛋白的四维(即在空间和时间上)可视化。然而，经常遇到的一个陷阱是在各种组织中(特别是在豆科植物中)具有高水平的自体荧光。在一些情况下，这个问题可以通过使用频谱分辨的CLSM来解决(例如使用徕卡TCS SP系统)。该系统使得在GH3启动子的情况下对GFP进行定量分析成为可能。然而，对于弱启动子活性，例如在ENOD40启动子的情况下，使用现有方法无法在自身荧光背景之上检测到GFP荧光。
继续阅读:引用Gpe
这篇文章有用吗?