RepA A蛋白的Dna结合特性参与根瘤菌repAbc家族共生质粒复制子区域的划分和自我调节
A. Pérez-Oseguera, M.A. Ramírez-Romero, M.A.塞瓦洛斯
Centro de Investigación清醒Fijación de Nitrógeno, A.P. A.P. 565-A。，莫雷洛斯州立大学库埃纳瓦卡分校México
作为repABC质粒家族的一员，R. etli共生质粒的复制子区域包含三个基因(repA、repB和repC)以及repB和repC之间的保守区域序列(Ramírez-Romero et al. 1997)。
对repABC基因的遗传分析表明，它们被组织在一个操纵子中。repA和repB基因编码质粒稳定性和质粒拷贝数控制所需的蛋白质。此外，RepA也被证明是反式作用的不相容因子(Ramirez-Romero et al. 2000)。
目前对repABC基因的调控知之甚少。为了了解该操纵子的转录特征:转录起始位点被确定。通过突变分析确定了repABC启动子的-10和-35六聚体元件的定位，通过遗传和生化分析确定了转录负调控因子及其靶位点。
构建了几个repA::gusA融合，以确定操纵子表达所需的最小DNA区域。结果表明，repABC操纵子的转录起始位点位于起始密码子oí rep a上游57 bp处，其上游序列与大肠杆菌cr70启动子一致的-35和-10框序列相似。对假定的-35和-10盒子的突变分析表明，它们被正确地识别出来。
repA存在时，repA::gusA融合的p -葡萄糖醛酸酶活性受到抑制，但与RepB和RepC存在时不受抑制，表明repA是负转录调控因子。
为了证明RepA与位于RepA基因上游的序列相互作用，我们采用了两种策略。首先，对含有repA::gusA的R. etli菌株进行体外DMS足迹分析，无论repA是否存在。这些实验结果表明，RepA的假定结合位点是位于RepA上游的一个由14个核苷酸组成的反向重复序列。其次，以纯化的RepA六磷酸衍生物和RepA上游160 bp区域作为目标DNA进行凝胶迁移率移位分析。这些实验表明，RepA能够与该DNA结合，并且这种活性对ATP或ADP有绝对的要求，说明ATP水解对DNA结合不是必要的。
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