蛋白质相互作用的监管和其他参与固氮基因产物Rhodobacter Capsulatus新曾帮工基因的识别
b . Masepohl p . Dreiskemper t . Drepper s Großn . Isakovic a . Pawlowski k·拉伯,
波鸿Ruhr-Universitat LS生物der Mikroorganismen d - 44780波鸿,德国
紫色光合细菌Rhodobacter capsulatus可以修复大气分子氮通过钼(«/ /编码)或另一个heterometal-free害怕(/«/编码)固氮酶。两个固氮酶的合成和活动都是由至少三个不同铵严格控制水平。在第一级,nifAl转录,nifA2, anfA基因编码转录激活物的其他«/ /和曾帮工基因-由正常系统组成的双组分关系控制监管体系NtrB / NtrC和信号转导蛋白GlnB (PII)。此外,表达glnK-amtB和amtY PII-paralog和两个假定的编码(methyl-ammonium转运蛋白——也是正常系统关系的控制。第二层次的监管、活动NifAl, NifA2, AnfA NtrC-independent地抑制。这个研究所翻译后控制铵NifA活动部分没有GlnK发布和完全废除glnB-glnK双突变体,而铵AnfA活动仍被压抑的glnB-glnK突变背景。第三个层次的监管,GlnB GlnK以及AmtB参与控制铵见鬼/拖动系统,介导的可逆ADP-ribosylation固氮酶铵还原酶,以应对变化的可用性。值得注意的是,在glnB——/ glnK双突变控制钼铵(但不是替代)的固氮酶是完全松了一口气,导致合成活性固氮酶高浓度铵的存在。
识别蛋白质相互作用上述调控蛋白,酵母2台混合动力(Y2H)进行了研究。为此,建立了一个r . capsulatus DNA库使用low-copy GAL4-based Y2H系统。这个库覆盖在坐标系的r . capsulatus基因组多方面的融合的激活域猎物质粒每12英国石油(bp)在编码链。测试库,GlnB被用作鱼饵。正如所料,发现了迄今为止最强的交互NtrB确认当前的监管模式。弱相互作用被发现NifA2,见鬼,ATP-dependent解旋酶PcrA。使用GlnK作为诱饵,与Ras-like蛋白质交互时代可以证明,而没有发现交互NtrB。然而,角色之间的交互GlnB / PcrA和GlnK /时代,分别仍有待阐明。此外,分析蛋白质对定义了交互与NifAl GlnB GlnK, GlnB本身。此外,蛋白质相互作用被发现NifAl-NifAl NifAl-NifA2, NifAl-GlnK NifA2-NifA2, NifA2-GlnK。 These results suggest that (i) NifAl and NifA2 may form both homodimers as well as heterodimers, and (ii) post-translational regulation of NifA activity in response to ammonium is mediated via direct interaction of the transcriptional activator with the PH-like signal transduction proteins.
使用Anfl(由一种位于下游的基因编码和co-transcribed anfHDGK)作为诱饵,两个新的假定cytoplasmatic曾帮工蛋白质,称为Orß49和0 rfl065 (TetR)。Orf349的角色和0 rfl065曾帮工蛋白质是由体内固氮酶活性的分析证实了相应的突变株。orß49和orfl065突变体并没有减少通过替代乙炔固氮酶,而钼固氮酶的活性没有影响。令人惊讶的是,orf349突变体仍能增长diazotrophically曾帮工系统尽管水平相比,减少父母的压力。
乙醛酸循环在r . LEGUMINOSARUM:描述的插入突变携带Tn5B22扰乱苹果酸SYNTHASE-ENCODING基因
a . garcia de los Santos1 a . Morales1 1。Hernandez-Lucas1, C.Y. Yost2, s . Brom1 Hynes2第一
Apdo, CIFN /自治。邮政565年,库埃纳瓦卡,铁道部。墨西哥
2部门的生物科学,卡尔加里大学,卡尔加里,AB,加拿大
1。介绍
我们一直感兴趣的隔离rhizobial基因打开的环境信号。糖常见植物细胞壁的成分可能在这些分子信号。Oresnik et al。(1998)报道的隔离plant-inducible鼠李糖轨迹参与争夺有节。这些数据鼓励我们寻找其他基因的表达是由糖,植物多糖的组成部分。
2。程序
我们筛选的3000 r . leguminosarum lacZ转座子的随机插入突变体携带Tn5B22供阿拉伯糖诱导。
3所示。结果与讨论
我们发现了一个染色体位点由阿拉伯糖诱导植物多糖的一个组成部分。BLASTX Tn5B22 ORF中断的分析显示高相似度不同的细菌苹果酸合成酶G(味精)的酶。味精参与乙醛酸的新陈代谢,通过催化不可逆转醇醛缩合乙醛酸和苹果酸乙酰辅酶a形成。味精序列的相似性是21残留物的存在强化了23味精严格保守的序列之前发表(Howard et al . 2000年)。此外,lacZ融合在假定的苹果酸合酶编码基因也由羧甲,一种化合物在大肠杆菌的转录激活味精(莫利纳et al . 1994年)。豌豆植物接种味精突变是短比接种wt应变和树叶呈现明显萎黄病。结节诱导的突变是白人,表明这种突变对固氮具有负面影响。
4所示。引用
学生物化学霍华德BR et al。(2000)。39岁,3156 - 3168年莫利纳我et al。(1994)欧元。学生物化学j。224年,541 - 548年Oresnik IJ et al . (1998) MPMI11, 1175 - 1185
5。确认
感谢CONACYT和DGAPA支持亚历杭德罗·加西亚de los Santos的博士后呆在实验室的迈克尔·海因斯卡尔加里大学的。
识别的基因受替代σ因子a54 RHIZOBIUMLEGUMINOSARUM BV。VICIAE VF39SM
S.R.D.克拉克,马丁Tabche B.T.史蒂文,a . Cieslak中频海因斯生物科学部门,卡尔加里大学,卡尔加里,加拿大的AB
1。介绍a54是一种“另类”σ因子由rpoN \编码识别启动子显示一个高度保守的共识序列-12/-24,5 ' - CTGGCAC-N5-TTGCA 3 (Beynon et al . 1983年)。在根瘤菌(独立系统包括运输和氮二羧酸的规定,和fixGHIS fixNOQP,和fnrN基因的根瘤菌leguminosarum bv。viciae VF39SM依赖a54完全感应microaerobic条件下(克拉克et al . 2001年)。a54 DNA在缺乏核心聚合酶,可以绑定允许σ因子参与消极以及积极的监管,根据间距(梅里克1993)启动子的结构。
2。过程
cy54策略用于识别假定的目标所使用的类似于bitting et al。(2000)。一个VF39SM rpoNv。RM046 QSp突变,转座子诱变处理,Tn5-B30 (Simon et al . 1989)。这个元素有promoterless新霉素基因,产生一个随机池记者融合。每个突变是镀复制品,一份收到pC028接合。这个质粒携带野生型rpoN基因,补充rpoN:: QSp等位基因。补充和uncomplemented形式的每一个突变体筛选泰含有新霉素含量的增加;阻力的差异水平预测每个插入的自然条件下(例如核磁共振测试只有在wt rpoN建议(独立)的存在。从总基因组DNA插入克隆被同调识别。
3所示。结果与讨论
大约2400突变体筛选到目前为止,54显示公认的、积极的监管和21显示假定的,消极的监管。获得的序列显示相同转座酶包括ISRm3和ISRle39 (Rochepeau et al . 1997);leucine-response蛋白质转录监管机构;和核酸酶抑制剂。转座酶之一,以及LRP-type调节器,插入宿主基因在相反的方向。上游侧翼序列将使用底漆Nmr获得基因。
4所示。引用
Beynon J,大炮,Buchanan-Wollaston V,大炮F(1983)细胞34岁,665 - 671
bitting马,待价而沽J (2000) J . Bacteriol。182年,1706 - 1713
克拉克阶跃恢复二极管,Oresnik IJ,海因斯MF(2001)摩尔。将军麝猫。264年,623 - 633
梅里克乔丹(1993)摩尔。Microbiol。10, 903 - 909
科万特西蒙•R J, Klipp W基因(1989)1989 80,161 - 169
Rochepeau P,其密封磅,海因斯MF(1997)摩尔。将军麝猫。256年,387 - 396
继续阅读:共生和Nonsymbiotic球蛋白基因的表达应对Microsymbionts Lotus Japontcus感染
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